Ústav klinické biochemie a hematologie

Klinická biochemie

Prof. MUDr. Jaroslav Racek, DrSc.

Ústav klinické biochemie a hematologie

Popis projektu

Úvod: Preanalytické vlivy významně mění výsledek laboratorního vyšetření. Vybrali jsme klinické vlivy s cílem posoudit, do jaké míry výsledek ovlivňují a jak tyto vlivy případě odstranit.

Cíl: Projekt se skládá ze čtyř studií, které se všechny týkají závažných preanalytických vlivů na výsledek laboratorního vyšetření. Všechny 4 projekty se zaměřují na dosud uspokojivě nezodpovězené otázky, jejich vyřešení povede k lepší péči o pacienty.

Porovnání 6 a 24hodinového sběru moče pro určení funkce a poškození ledvin

Základní funkcí ledvin je glomerulární filtrace, která se stanovuje jako clearance endogenního kreatininu. Cílem studie je porovnat výsledek vyšetření za využití „klasického“ 24hodinového sběru moči a zkráceného 6hodinového sběru. Kratší sběr by byl jednodušší pro pacienty a zároveň by se dalo předpokládat méně chyb při sběru moči.

Vyšetření plánujeme provést u 25 pacientů z diabetologické ambulance I. interní kliniky FN v Plzni v rámci běžné péče nebo rekondičních pobytů diabetiků; bude vyšetřeno i 25 zdravých osob ze zdravotnického personálu. Nejedná se tedy o vyšetření navíc, jediná změna je, že po skončení prvých 6 hodin sběru moči se moč promíchá a odebere její vzorek. Pak se pokračuje se sběrem a další vzorek se odebere až po ukončení 24 hodin. Clearance kreatininu bude vypočtena z obou sběrů moči a výsledky budou porovnány. Současně se porovnají s odhadem glomerulární filtrace podle sérové koncentrace kreatininu a cystatinu C.

Interference redukujících látek na stanovení analytů u metod zakončených Trinderovou reakcí

Trinderova reakce, katalyzovaná peroxidázou, vede k vývinu měřitelného zabarvení a je využívána v klinické biochemii v celé řadě běžných analýz (mj. při stanovení glukózy, cholesterolu, triacylglycerolů, laktátu, kreatininu a kyseliny močové). Může být ovlivněna přítomností redukujících látek v biologickém materiálu, což vede k falešně nízkým výsledkům. Nejvíce se to projeví u těch analytů, které jsou v krevním séru v nízké koncentraci (kreatinin, kyselina močová). Pomocí standardních přídavků redukujících látek v koncentraci vyskytující se v krevním séru bude testován jejich vliv na stanovení kreatininu a kyseliny močové a zhodnocen jeho význam. Testovány budou: bilirubin, kyselina askorbová, kyselina mléčná, kyselina 3-hydroxymáselná, katecholaminy. Experimenty budou prováděny na zbytcích krevních sér, ze kterých bude vytvořen směsný vzorek. Pro validní výsledky není potřeba pracovat s identifikačními ani klinickými údaji, směsná séra budou anonymní a při zpracování dat ani při publikaci nebudou žádné údaje o nemocných užity. Nejedná se ani o odběr krve navíc, využity budou zbylé vzorky krevního séra, které by jinak byly zlikvidovány. Z těchto důvodů nebude vyžadován informovaný souhlas nemocných.

Porovnání dvou metod odstranění chylozity vzorků

Chylozita krevního séra, způsobená zvýšenou koncentrací triacylglycerolů, může ovlivnit řadu biochemických analýz nebo jejich provedení zcela znemožnit. V praxi se k odstranění chylozity někdy užívá přídavek činidla Lipoclear s následným odstředěním. Tím je však změněno složení vzorku a některé, zejména imunochemické analýzy nelze provést. Další možností je centrifugace při vysokých otáčkách; u tohoto postupu však není zcela jasná efektivita. Proto chceme porovnat různé protokoly odstřeďování za využití v klinických laboratořích běžně dostupných centrifug, nebude tedy třeba ultracentrifuga. Budeme sledovat objektivní parametr ukazující stupeň chylozity vzorku a jeho redukci po centrifugaci.

Experimenty budou prováděny na zbytcích krevních sér. Pro validní výsledky není potřeba pracovat s identifikačními ani klinickými údaji, séra budou anonymní a při zpracování dat ani při publikaci nebudou žádné údaje o nemocných užity. Nejedná se ani o odběr krve navíc, využity budou zbylé vzorky krevního séra, které by jinak byly zlikvidovány. Z těchto důvodů nebude vyžadován informovaný souhlas nemocných.

Interference hydrogenuhličitanů (HCO3-) při stanovení chloridů

Měření chloridů iontově selektivní elektrodami není zcela specifické. Z klinicky významných interferencí se setkáváme s interferencí HCO3-, vzácněji jodidy a bromidy ve vysoké koncentraci. Pro řádné hodnocení acidobazické rovnováhy (ABR) je přesné a pravdivé měření chloridů velmi přínosné.

Studie již byla ukončena a výsledky zhodnoceny, výsledky čekají na publikaci. K analýzám jsme využili zbytkovou arteriální krev po rutinně indikovaných vyšetřeních acidobazické rovnováhy a krevních plynů na M-JIP I. Interní kliniky FN Plzeň. Po provedení POCT analýzy (přístroj GEM Premier 4000, IL Laboratories) byla krev dopravena do centrální laboratoře, kde bylo ihned provedeno vyšetření na analyzátoru krevních plynů a ABR (ABL800, Radiometer). Zbylá krev byla centrifugována a plazma rozdělena do několika alikvotů, zamrazena a uchovávána při teplotě -80 °C. Po nasbírání dostatečného množství vzorků v širokém rozmezí koncentrací HCO3- (přibližně 5 až 50 mmol/L) bylo provedeno měření chloridů na automatickém rutinním analyzátoru (Cobas 8000, Roche) a coulometricky. Výsledky byly srovnány a posouzen vliv HCO3 – u jednotlivých způsobů měření.

Metodika: Skupiny nemocných (charakteristika a reálné počty nemocných, ev. kontrolní skupiny)25 pacientů z diabetologické ambulance I. interní kliniky FN v Plzni v rámci běžné péče nebo rekondičních pobytů diabetiků; bude vyšetřeno i 25 zdravých osob ze zdravotnického personálu. 50 pacientů se zvýšenou chylozitou séra, které zachytíme při při analýze rutinních vzorků (nevyžaduje odběr materiálu od pacienta)

Závěr: Výsledky těchto studií jsou přímo aplikovatelné do klinické praxe a zlepší péči o pacienty ve FN Plzeň. Studie navazuje na předchozí naše projekty, které řešily jiné preanalytické vlivy (hemolýza) a vlivy na interpretaci laboratorních výsledků (stanovení referenčních rozmezí). Zjednodušení sběru moče a eliminace interferencí při stanovení běžných analytů jsou jednoznačné benefity, které řešení našich studií přinese.

Projektu bylo uděleno schválení Etické komise FN a LF UK v Plzni č.  373/2020